使用前在 400 ℃灼燒 4h，冷卻后密封保存在磨口玻璃瓶中。
5.4 氫氧化鈉(NaOH)。
5.5 甲醇(CH3OH)：農(nóng)殘級。
5.6 二氯甲烷(CH2Cl2)：農(nóng)殘級。
5.7 丙酮(CH3COCH3)：農(nóng)殘級。
5.8 甲醇水溶液：2+3。
用甲醇(5.5)和水按 2:3 體積比混合。
5.9 氫氧化鈉溶液：c(NaOH)=6mol/L。
稱取 24.0g 氫氧化鈉(5.4)溶于水中，稀釋至 100ml。
5.10 苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)： w ≥96%。
5.11 苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=1.00mg/ml。
分別稱取苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(5.10)0.100g(精確到 0.1mg)，用丙酮(5.7)溶解后， 轉(zhuǎn)移到 100ml 容量瓶中，用丙酮(5.7)定容至標(biāo)線。標(biāo)準(zhǔn)貯備液在-20 ℃下避光、冷凍保存，保存期為1年。也可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，并按照制造商的產(chǎn)品說明書保存。
5.12 苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)中間液：ρ=100µg/ml。
取 1.00ml 苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)貯備液(5.11)于 10ml 容量瓶中，用丙酮(5.7)定容至標(biāo)線，于4℃下避光、冷藏保存，保存期為60d。
5.13 苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=2.00µg/ml。
取 200µl 苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)中間液(5.12)于10 ml 容量瓶中，用甲醇水溶液(5.8)定容 至標(biāo)線，于 4 ℃下避光、冷藏保存，保存期為 40d。
5.14 固相萃取柱：填料為苯乙烯/二乙烯苯-N-乙烯基吡咯烷酮聚合物或其他等效萃取柱，60mg/3 ml。
5.15 濾膜：0.22µm 聚四氟乙烯膜。
5.16 氮?dú)猓杭兌?ge;99.99%。
6 儀器和設(shè)備
6.1 高效液相色譜儀：耐壓 6MPa(600bar)，具紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
6.2 色譜柱：填料粒徑為 2.7µm，柱長15cm，內(nèi)徑 4.6mm 的 C8反相色譜柱，或其它適用于酸性 條件的等效色譜柱。
6.3 濃縮裝置：氮吹儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。
6.4 自動固相萃取儀或固相萃取裝置。
6.5 樣品瓶：1000ml 具磨口塞的棕色玻璃瓶或帶聚四氟乙烯襯墊螺口棕色玻璃瓶。
6.6 一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。
7 樣品
7.1 樣品采集和保存
按照 GB 17378.3、GB/T14581、HJ/T91、HJ 91.1、HJ 164、HJ 442.3 要求進(jìn)行樣品采集。樣品采集后，4 ℃冷藏、避光保存，7d 內(nèi)完成萃取，萃取液在 15d 內(nèi)分析完畢。
7.2 試樣的制備
7.2.1 樣品水解
量取 250ml 水樣至 500ml 分液漏斗中，用氫氧化鈉溶液(5.9)調(diào)節(jié)溶液 pH≥12，搖勻后靜置 1h。
注：如果不需要測定苯氧羧酸酯類化合物，可以不進(jìn)行樣品的水解。
7.2.2 液液萃取
用磷酸(5.1)調(diào)節(jié)水解后的試樣(7.2.1)至 pH≤2，加入15g 氯化鈉(5.2)，振搖使其溶解。 加 20ml 二氯甲烷(5.6)，振蕩放氣后，振蕩萃取 5min，靜置 15min，待兩相分層后，收集有機(jī)相 于三角瓶中。再用 20ml 二氯甲烷重復(fù)萃取兩次。合并有機(jī)相，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉(5.3)脫水后 于 40 ℃水浴氮吹濃縮至近干，用 5ml 實(shí)驗(yàn)用水溶解，待凈化。
將固相萃取柱(5.14)放到固相萃取裝置(6.4)上。用 5 ml 甲醇(5.5)以 2 ml/min 左右速度 通過固相萃取柱，在填料將要暴露于空氣之前，向柱上加 5ml 實(shí)驗(yàn)用水，待實(shí)驗(yàn)用水剩約 1ml 左右 時(shí)，停止活化。向活化后的萃取柱上加入待凈化的萃取液，并以 1ml/min 速度全部通過柱子后，繼 續(xù)抽吸 10min 或用氮?dú)?5.16)吹掃，使萃取柱干燥。然后用 10ml 甲醇(5.5)洗脫，收集洗脫液，于 50 ℃水浴氮吹濃縮至近干，用甲醇水溶液(5.8)定容至 1.0ml，混勻后經(jīng) 0.22μm 濾膜(5.15)過濾，待測。
7.2.3 水樣直接固相萃取
對于除草劑工業(yè)廢水，將水樣或水解后的試樣(7.2.1)用磷酸(5.1)調(diào) pH 為中性，取 5.0ml 樣品以 1ml/min 速度全部通過活化后的固相萃取柱(7.2.2)，繼續(xù)抽吸 10min 或用氮?dú)?5.16)吹 掃，使萃取柱干燥。然后用 10ml 甲醇(5.5)洗脫，收集洗脫液，于 50 ℃水浴氮吹濃縮至近干， 用甲醇水溶液(5.8)定容至 1.0ml，混勻后經(jīng) 0.22μm 濾膜(5.15)過濾，待測。
7.3 空白試樣的制備
用實(shí)驗(yàn)用水代替樣品，按照與試樣的制備(7.2)相同的步驟進(jìn)行空白試樣的制備。
8 分析步驟
8.1 儀器參考條件
流動相 A：甲醇；流動相 B：磷酸水溶液(用磷酸調(diào) pH=3.0±0.1)；流速：0.5ml/min；柱溫： 30 ℃；檢測波長：230nm；進(jìn)樣量：20.0μl。梯度洗脫程序見表 1。
8.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
分別取適量苯氧羧酸類除草劑標(biāo)準(zhǔn)使用液(5.13)，用甲醇水溶液(5.8)稀釋，制備至少 5 個(gè) 濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度分別為 0.020mg/L、0.040mg/L、0.400mg/L、1.00mg/L、 2.00mg/L、4.00mg/L(此質(zhì)量濃度為參考濃度)。按照儀器的參考條件(8.1)，由低濃度到高濃度 依次進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
8.3 測定
按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立(8.2)相同的條件對凈化后的試樣(7.2.2或7.2.3)進(jìn)行測定。當(dāng)水樣 的濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍時(shí)，應(yīng)減少取樣量或稀釋洗脫液后，再進(jìn)行測定。
8.4 空白試驗(yàn)
按照與試樣測定(8.3)相同的條件對空白試樣(7.3)進(jìn)行測定。
9 結(jié)果計(jì)算與表示
9.1 定性分析
根據(jù)樣品中目標(biāo)化合物與標(biāo)準(zhǔn)系列中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間進(jìn)行定性，可采用標(biāo)準(zhǔn)加入法、不 同波長下的吸收比或掃描紫外吸收光譜等方法輔助定性。必要時(shí)，可采用高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法對目標(biāo)化合物進(jìn)行確認(rèn)。7種除草劑的離子對和多離子監(jiān)測條件參見附錄B。
在本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的儀器參考條件(8.1)下，苯氧羧酸類除草劑的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖 1。
9.2 結(jié)果計(jì)算
9.3 結(jié)果表示
測定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)的保留與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。
10 準(zhǔn)確度
10.1 精密度
10.1.1 直接固相萃取的精密度
6家實(shí)驗(yàn)室對7種苯氧羧酸類除草劑濃度分別為 12.0μg/L、80.0μg/L 和 600μg/L 的空白加標(biāo)樣 品進(jìn)行了6次重復(fù)測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 1.5%——8.7%、1.7%——7.9%和 1.1%——8.1%； 實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 3.7%——7.8%、 3.2%——14.3%和 3.3%——25%；重復(fù)性限分別為 1.4µg/L—— 1.9µg/L、 5.2µg/L——12.0µg/L 和 59µg/L——92µg/L；再現(xiàn)性限分別為 1.7µg/L——3.1µg/L、 12.9µg/L——26.5µg/L 和 111µg/L——357µg/L。
6 家實(shí)驗(yàn)室對7種苯氧羧酸類除草劑濃度為200μg/L 的統(tǒng)一工業(yè)廢水加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù) 測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 1.6%——8.8%；實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 3.8%——22%；重復(fù)性限為 24µg/L——40µg/L；再現(xiàn)性限為31µg/L——95µg/L。
10.1.2 液液萃取的精密度
6 家實(shí)驗(yàn)室對7種苯氧羧酸類除草劑濃度分別為 0.240 μg/L、1.60μg/L 和 12.0μg/L 的空白加標(biāo) 樣品進(jìn)行了 6 次重復(fù)測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 2.1%——17%、1.4%——11%和 2.0%——9.7%； 實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 2.8%——10%、6.3%——24%和 4.8%——19%；重復(fù)性限分別為 0.02μg/L—— 0.04μg/L、0.16 μg/L——0.26 μg/L 和 1.5 μg/L——2.5μg/L；再現(xiàn)性限分別為 0.04 μg/L——0.07 μg/L、0.33 μg/L——0.83μg/L 和 2.2μg/L——5.9μg/L。
6家實(shí)驗(yàn)室對7種苯氧羧酸類除草劑濃度為0.240μg/L的統(tǒng)一地表水加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測 定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.1%——16%；實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 4.3%——14%；重復(fù)性限為 0.04 μg/L——0.05μg/L；再現(xiàn)性限為 0.05μg/L——0.10μg/L。
6 家實(shí)驗(yàn)室對 7 種苯氧羧酸類除草劑濃度為 1.60μg/L 的統(tǒng)一生活污水加標(biāo)樣品進(jìn)行了 6 次重復(fù) 測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 1.8%——15%；實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 8.1%——16%；重復(fù)性限為 0.2 μg/L——0.4μg/L；再現(xiàn)性限為 0.4μg/L——0.8μg/L。精密度結(jié)果參見附錄C。
10.2 正確度
10.2.1 直接固相萃取的正確度
6 家實(shí)驗(yàn)室對7種苯氧羧酸類除草劑濃度分別為 12.0μg/L、80.0μg/L 和 600μg/L 的空白加標(biāo)樣 品進(jìn)行了加標(biāo)回收率測定。麥草畏的加標(biāo)回收率分別為 85.8%——105%、65.0%——94.5%和 57.6%—— 100%，其他除草劑的加標(biāo)回收率分別為 85.7%——108%、81.3%——103%和 78.0%——105%。加標(biāo)回收率 最終值分別為 93.8%±6.8%——97.9%±14.8%、79.6%±22.8%——101%±19.0%和 84.7%±42.0%—— 99.1% ±13.8%。 6 家實(shí)驗(yàn)室對含苯氧羧酸類除草劑的工業(yè)廢水進(jìn)行了加標(biāo)回收率測定，加標(biāo)濃度為 200µg/L， 麥草畏的加標(biāo)回收率為 51.0%——96.0%，其他除草劑加標(biāo)回收率為 83.3%——115%，加標(biāo)回收率最終值 為 72.8%±15.2%——102%±9.4%。
10.2.2 液液萃取的正確度
6 家實(shí)驗(yàn)室對7種苯氧羧酸類除草劑濃度分別為 0.240 μg/L、1.60μg/L 和 12.0μg/L 的空白水樣 加標(biāo)樣品進(jìn)行了加標(biāo)回收率測定。麥草畏的加標(biāo)回收率分別為 70.8%——90.8%、52.1%——93.8%和 51.5%——87.8%。其他除草劑的加標(biāo)回收率分別為 82.1%——105%、85.6%——118%和 70.3%——118%。加 標(biāo) 回 收 率 最 終 值 分 別 為 81.8%±16.6% —— 98.6%±13.0% 、 75.5%±22.8% —— 105%±15.8% 和 69.5%±26.2%——100%±25.4%。
6 家實(shí)驗(yàn)室對含7種苯氧羧酸類除草劑的地表水和生活污水進(jìn)行了加標(biāo)回收率測定，加標(biāo)濃度分別為0.240μg/L和 1.60μg/L。麥草畏的加標(biāo)回收率分別為58.6%——90.2%和64.2%——91.9%；其他除草劑的加標(biāo)回收率分別為67.5%——116%和 68.7%——113%，加 標(biāo) 回 收率 最 終值分別為78.2%±11.7%——99.4%±12.6%和 76.0%±11.7%——96.8%±15%。 正確度結(jié)果參見附錄C。
11 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制
11.1 空白試驗(yàn)
每 20 個(gè)樣品或每批次(少于2個(gè)樣品/批)至少分析1個(gè)實(shí)驗(yàn)室空白，空白中目標(biāo)化合物的濃 度應(yīng)低于方法檢出限。
11.2 校準(zhǔn)
標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)≥0.999。每 20個(gè)樣品或每批次(少于20個(gè)樣品/批)應(yīng)分析測定1個(gè)曲線 中間濃度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果與曲線該點(diǎn)濃度的相對誤差應(yīng)在±15%以內(nèi)。否則，應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
11.3 平行樣
每20個(gè)樣品或每批次(少于20個(gè)樣品/批)應(yīng)分析測定1個(gè)平行樣，平行樣測定結(jié)果的相對偏差≤25%。
11.4 空白加標(biāo)和基體加標(biāo)
每20個(gè)樣品或每批次(少于20個(gè)樣品/批)應(yīng)分析測定1個(gè)基體加標(biāo)樣品，麥草畏的回收率應(yīng)在50%——110%之間，其他除草劑的加標(biāo)回收率應(yīng)在65%——120%之間。
12 廢物處置
實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的有機(jī)廢液應(yīng)集中收集和保管，并做好相應(yīng)的標(biāo)識，依法委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。
13 注意事項(xiàng)
13.1 苯氧羧酸類除草劑常以酯類化合物形式使用，但其酯類化合物不穩(wěn)定，進(jìn)入水體后易水解成相應(yīng)的酸類化合物。如果要測定水中苯氧羧酸類除草劑的總量，需要在萃取前加堿將苯氧羧酸的酯類化合物先水解成相應(yīng)的苯氧羧酸鹽類化合物。
13.2 對于樣品中有堿、中性化合物干擾測定，可向水解后的試樣(7.2.1)中加入 20ml 二氯甲烷(5.6)，振蕩放氣后，振蕩萃取5min，靜置15min，待兩相分層后，棄去下層有機(jī)相。再加入 20ml 二氯甲烷重復(fù)萃取一次，棄去下層有機(jī)相，水相按萃取步驟(7.2.2)進(jìn)行萃取。
原標(biāo)題：關(guān)于征求《水質(zhì) 浮游植物的測定 顯微鏡計(jì)數(shù)法(征求意見稿)》等2項(xiàng)國家生態(tài)環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)意見的通知